¿Cómo utilizar las micropipetas?

Por | diciembre 3, 2009

No se puede tener un instrumental más “usado” que las micropipetas en un laboratorio de biología molecular. Dejando a parte el desgaste y mal uso, una correcta utilización asegura el buen rendimiento de las reacciones de PCR, por ejemplo. Pero, ¿cómo utilizar las micropipetas? A parte de la elección de las puntas adecuadas (hay algunas que no se adhieren bien…y ya estamos en el problema del dinero y las marcas, pero no quiero meterme en eso ahora), la selección de la micropipeta para la medición seleccionada y de estar bien seguros de haber realizado las medidas previas correctamente, el problema está en el uso del émbolo. La ilustración siguiente explica lo que se suele enseñar (o por lo menos se enseñaba) en las prácticas de laboratorio:

Técnica para el uso de las micropipetas

Técnica para el uso de las micropipetas


1º Se aprieta el émbolo hasta el primer tope.
2º Se introduce la punta y se aspira el contenido previamente ajustado en la micropipeta. Con cuidado de no generar burbujas
3º A la hora de verter el volumen aspirado, se aprieta hasta el primer tope,
4º y se aprieta hasta el segundo tope para soltar el volumen completamente.
5º y 6º Se desecha la punta en el recipiente correspondiente después de terminar.

Esto es lo que se suele aprender. Pero luego depende de las marcas y de cómo absorben los volúmenes. Incluso de las diferentes micropipetas dentro de la misma marca. El dibujo, si se recuerda de cuando se daban prácticas, pertenece a unas micropipetas tipo Gilson. Algo rudas en su manejo, pero eficaces al fin y al cabo. Lo que quería saber y comentar es cómo las soléis usar. Así se puede aprender un poco y mejorar las técnicas. Por ejemplo, en mi micropipeta de 12 canales se aconseja el uso en el manual de instrucciones. Allí se explica que lo mejor es apretar hasta el segundo émbolo y luego absorber el volumen resultante (previamente seleccionado el volumen, claro). Se vierte hasta el primer tope y , en las sucesivas pasadas, sólo se debe apretar hasta el primer tope y verter apretando siempre hasta el primer tope. Curioso esto del pipeteo ¿no?

Escuchando: Podcast número 15 de iCharlas

Artículos relacionados:

  1. Lo maravilloso de las micropipetas

Share

6 thoughts on “¿Cómo utilizar las micropipetas?

  1. avatarCESAR

    Me parece curioso porque ahora mismo estoy en ese dilema, hay gente que las usa vertiendo hasta el segundo tope, y otras hasta el primero, sobre todo por la cuestión de las burbujas. Además, algunas punteras también funcionan mejor que otras porque algunas retienen fluido tras varios “pipeteos”.

    Reply
    1. doctorGENoma Post author

      Hola César. Lo de la retención del fluido tras varios pipeteos es cierto. A mi me ocurre con todas las micropipetas. Ahora utilizo las marcas Gilson y Finnpipette y tras utilizar las puntas, tanto de la misma marca como genéricas, en pipeteos masivos (como en placas multipocillos) terminan tomando ese volumen debido a la presión del fluido. Estas son pequeñas cosas que suceden en el laboratorio. Gracias por tu comentario.

      Reply
  2. avatarCarmen

    Hola que tipo de ejercicio me pueden recomendar para las personas que recien se inician en el uso de estas micropipetas, estudiantes por ejemplo?

    Reply
    1. doctorGENoma Post author

      Pues se podrían hacer unos ejercicios simples, siempre después de haber practicado la teoría que expuse en el artículo. Con tubos de 1,5 ml, el profesor puede añadir volúmenes medidos y hacer que los alumnos vayan pasando a otros tubos cantidades inferiores. Suelo enseñar a mis alumnos que pipeteen con puntas finas (amarillas o transparentes, para volúmenes de unos 10 microlitros a 0,5 microlitros) y alojen los líquidos en las paredes de varios tubos de 0,2 microlitros. Así cogerán destreza, observarán el deslizamiento de los fluidos por las paredes de los tubos y comenzarán a controlar el pulso. Así también, como los volúmenes estarán medidos, se puede comprobar el posible error de pipeteo que ocurre en los ensayos y aprender así a ser conscientes de cómo preparar mezclas de reacción que luego añadir a diversas muestras.
      Muchas gracias por el comentario, Carmen. Si necesitas algo más, aquí me tienes. Un saludo desde el lab ;)

      Reply
  3. avatarvictordel

    Hola, solo para compartir mi experiencia, cuando hago PCR convencional y Real Time, uso la última técnica (absorber con los 2 tiempos y luego usar el primer tiempo) lo hago por el tema de las burbujas que pueden desnaturalizar la Taq-polimerasa y me va muy bien incluso se nota que la reproducividad tiene mayor precisión cuando calibro mi curva standard en el Real Time. Sin embargo me gustaría saber si alguien tiene un argumento coherente para no realizar ésta técnica de pipeteo, saludos.

    Reply
    1. doctorGENoma Post author

      Hola Víctor. Lo mejor es seguir las instrucciones del fabricante en primer lugar. Pero si usas un juego de micropipetas para tí (o para dos personas a lo sumo), la técnica es a gusto del consumidor y de para qué lo use. Yo he trabajado con micropipetas que al absorber volúmenes (tampoco muy elevados) apretando hasta el segundo tope la succión provocaba contaminaciones. Como lo lees. El deje de los investigadores a la hora de pipetear podría causar contaminaciones con volúmenes elevados fácilmente. Desde hace unos 6 años para acá, no he vuelto a ver problemas con micropipetas para volúmenes moderados. Es más, como comento en el artículo, ya has visto que yo también uso ese método con la multicanal.
      Un abrazo y gracias por el comentario ;)

      Reply

Deja un comentario

Tu dirección de correo electrónico no será publicada. Los campos necesarios están marcados *


*