Extracción de ADN casera para docencia

Tras mi paso por innumerables ferias científicas, la extracción de ADN casera para docencia ha sido siempre un éxito. Aquí explicaré cómo realizarla paso a paso. Pero sin explicaciones. Eso os lo dejo por si hay suficientes visitas y comentarios.

Eso sí: os recuerdo a todos los profesionales de la enseñanza,que hay que documentarse bien para poder hablar sobre nuestro ácido más desoxirribonucleico y así mantener con la boca abierta el público.

MATERIAL NECESARIO:

  1. Agua embotellada.
  2. Vasos de plástico.
  3. Instrumento para verter volúmenes de unos 3 ml y poder absorber (por ejemplo, una pipeta Pasteur de plástico).
  4. Viales de unos 10 o 15 ml alargados, parecidos a los viales de extracción de sangre.
  5. Alcohol puro o al 96%.
  6. Preparar alcohol al 70 %.
  7. Sal de mesa.
  8. Jabón lavavajillas.
  9. Recipiente para preparar la solución de lisis (una botella de plástico pequeña).
  10. Hielo seco o en su defecto hielo convencional.
  11. Tubos de 1,5 ml (o similares) para llevarse el ADN. Estos tubos deben rellenarse hasta 2/3 del volumen total con alcohol al 70%.
  12. Rotuladores y/o etiquetas.

PROCEDIMIENTO:

1) Preparar la solución o tampón de lisis. Para ello, preparar una solución saturada de sal en agua (embotellada o del grifo). Para facilitar la solubilidad de la mezcla, utilizar agua caliente. Añadir lavavajillas hasta 1/5 del volumen total.

2) Preparar tubos de 10/15 ml con alcohol puro o al 96%. Se debe rellenar cada vial hasta la mitad. Mantener en frío hasta realizar la extracción. Si no se tiene hielo seco, se deben mantener en el congelador y sacarlos para realizar la extracción, manteniéndolos en hielo convencional (4º C).

3) Preparar los instrumentos de absorción y vertido (Pipetas Pasteur o similares) sumergidas en alcohol puro o de 96% para limpieza.

4) Pasos a seguir para la extracción:

-Echar muy poca agua en un vaso de plástico. La mitad del volumen necesario para cubrir la base del vaso con agua.

-Los alumnos deben enjuagarse con el agua a la vez que se mordisquean suavemente los carrillos por dentro. El agua no se debe tragar. Mantener el enjuague unos 20 segundos.

-Expulsar el enjuagado de nuevo en el vaso.

-Llenar la pipeta Pasteur con el tampón de lisis y echar dicho volumen dentro del vaso con el enjuagado.

-Los alumnos deberán mover el vaso circularmente durante dos o tres minutos.

-Verter el contenido del vaso en un tubo de ensayo (de unos 10 ml) en el cuál se tenga alcohol puro (lo más puro posible) y frío en la mitad de volumen de lo máximo contenido por dicho vial.

Si es de 10 ml, llenado con alcohol aproximadamente 5-6 ml. La forma de verter el «lisado» en el contenedor con alcohol debe ser lentamente e inclinando el tubo ligeramente para que el enjuagado resbale por la pared de dicho tubo.

-Mantener el tubo en vertical. No agitarlo. El vaso con el resto de enjuagado lisado (si quedase) se debe desechar. En este momento se producirá la separación del ADN. La foto de más arriba muestra la maraña de lo que es ADN, entre otras cosas. De nuevo este espacio de tiempo debe rellenarse con la verborrea del docente.

-Finalmente se «pescará» el ADN con el utensilio que mejor venga al docente. La pericia del docente es clave tanto para enseñar «la pesca» como para explicar el porqué de lo que se observa. Eso y las preguntas que les habrán surgido a los alumnos durante el transcurso de la práctica.

-El ADN se puede entregar en los tubos de 1,5 ml etiquetados con su nombre.

RECOMENDACIONES:

Dependiendo de los alumnos o el público que asistirá habrá que estar más o menos preparado para explicar de una forma más o menos científica todo el proceso.

Los materiales deberían tenerse calculados para más gente de la esperada. Nunca se sabe lo que puede ocurrir.

La formación del docente sobre fundamentos genéticos a la hora de explicar la práctica es clave. Abstenerse de hacer la práctica si no se tiene un afán divulgativo. Explicar mal las dudas hunde el objetivo que es enseñar y explicar la ciencia de forma divertida. 

Dependiendo de la calidad del lisado y, por tanto, de los alumnos que obtengan su enjuagado, la precipitación se puede hacer con alcohol a temperatura ambiente. Pero es aconsejable que esté bien frío.

Si se necesita más información sobre todo el proceso, que no haya duda alguna de ponerse en contacto conmigo

Legion desoxirribonucleica
Toda una legión de tubos listos para la divulgación genética.
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Extracción de ADN

Lo más habitual en cualquier laboratorio de genética es extraer el ADN de cualquier tejido o superficie. En mi caso he podido extraer ADN de hojas de plantas, de semillas, de tejido de lagarto, de lodo, de sangre…e incluso de los compuestos obtenidos de un tanque de fermentación.
Hace unos años era necesario preparar para cada ocasión una serie de tampones o buffers para poder extraer el material hereditario. Y cada disolución tenía que prepararla cada uno. Ahora todo es muy sencillo. Existen kits de extracción para cada tipo de tejido o muestra a analizar. La utilización de estos kits tienen sus pros y sus contras: generalmente la eficiencia de la extracción (la cantidad de ADN obtenido por extracción) suele ser bastante mayor con los métodos tradicionales. Sin embargo, la pureza del ADN aislado es mayor cuando se usan los kits. Dependiendo para qué se vaya a utilizar el ADN y el tipo de estudio, será mejor tener más ADN y menos puro ó viceversa. Las nuevas tecnologías suelen «funcionar» mejor cuanto más limpia sea la extracción, ya que en muchas ocasiones recomiendan purificarlo.

kit de extracción de ADN
kit de extracción de ADN

A modo informativo y dependiendo de la muestra, el tiempo para extraer ADN oscila entre 30 minutos y una hora. Cuantas más muestras se tengan a extraer a la vez, mayor será el tiempo.
Cuando ya se tiene el vial con el ADN disuelto en el tampón de elución, siempre hay que hacer una cuantificación. Con aparatos como el NanoDrop, la cantidad de ADN utilizado para cuantificar es de tan sólo 1 microlitro. Para hacerse una idea, es poco más de lo que ocupa la impresión del punto en el teclado de un ordenador. Hay ocasiones en que existen problemas con las mediciones y se opta por seguir el método tradicional que consiste en hacer un gel de agarosa a una concentración del 0,8% y realizar una electroforesis de todas las extracciones. Posteriormente, la imagen que se obtiene en el transiluminador de rayos ultravioleta (siempre que se utilicen marcajes como el bromuro de etidio o SybrGreen) se utiliza para hacer un cálculo estimado de la concentración de ADN gracias a la extrapolación que nos permite el marcador de fragmentos de ADN (un marcador de ADN en escalera (DNA ladder) no es más que un fragmento de ADN el cuál ha sido cortado de forma que se obtienen bandas de un tamaño conocido), ya que sí que sabremos la concentración cargada en el gel de ese marcador.
ejemplo de gel de electroforesis en gel de agarosa. Las concentraciones de las muestras se observan en microgramos/microlitro
ejemplo de gel de electroforesis en gel de agarosa. Las concentraciones de las muestras se observan en microgramos/microlitro

Bueno, aquí he dejado unas nociones básicas de una de las primeras partes del trabajo en un laboratorio de Genética. Espero que os haya gustado.

Escuchando: canciones en Jamendo.com

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