Review del sistema Mini-PROTEAN 3 cell de Bio-Rad

Por | mayo 2, 2010


Desde hace casi cuatro años me ha tocado lidiar con los geles de poliacrilamida (ver preparación de PAGEs) en multitud de variantes: desde los destinados a secuenciación a los utilizados en aparatos analizadores de fragmentos como el LiCOR 4300, de los sistemas caseros a los sistemas como el Protean II ó este mini-PROTEAN 3. De todas formas, el verdadero factor limitante está en la manipulación de la poliacrilamida y que los sistemas funcionan mejor dependiendo de ciertas condiciones y temperaturas.
En esta ocasión me gustaría hablar de este kit de Bio-Rad. El buen manejo de todo por sus reducidas dimensiones hacen que sea un buen compañero de laboratorio. Una de las grandes faenas es que salga mal la polimerización (aunque con los kits comerciales de polimerización, es bastante raro que falle) y con la consiguiente repetición de todo el proceso de limpieza y montaje. Con este sistema, los dos geles pueden estar corriendo a las 2 horas de haber empezado de cero. Pero de cero de verdad. Desde sacar las cosas de la caja hasta preparar las soluciones necesarias. Eso sí, el reducido tamaño de los geles hace que no estén destinados a análisis de bandas a gran resolución. Pero para probar están bién. Yo he hecho probatinas de técnicas para luego extrapolarlas a geles de dimensiones mayores.
En el montaje, previa limpieza de todos los componentes con etanol, hay que tener cuidado con los cristales. Los que tienen los espaciadores integrados son gruesos, pero las parejas son casi como cartulinas. No se me han llegado a romper ninguno, pero se nota la fragilidad. Os dejo el sistema de montaje para que lo veáis:

Dependiendo de la consistencia de los geles (que la proporcionará la concentración del gel en su mayoría y la calidad de las soluciones empleadas), extraer los geles de los cristales puede ser el paso más crítico por el riesgo de rotura. Siempre se pueden dejar los cristales y embeber el conjunto en las soluciones para teñir (en mi caso he utilizado nitrato de plata y bromuro de etidio como prueba), pero que no pase de la solución de fijación para no tener los cristales “manchados” para futuros geles.
Os muestro un ejemplo de geles teñidos con plata a continuación:

Ejemplo de Geles de poliacrilamida final

Geles de poliacrilamida utilizando el sistema Mini-PROTEAN 3. Pinchar en la imagen para agrandar


Como resumen, las ventajas del sistema son: la rapidez, la manejabilidad en el uso y el buen funcionamiento. Como desventajas: la fragilidad de los cristales, la poca resolución en comparación con sistemas más grandes, el número de pocillos que se originan por los peines que trae de serie y el deterioro que se produce con el paso del tiempo en las zonas de los separadores que originan fugas a la hora de polimerizar (que se pueden siempre solventar con truquitos como agarosa).
Espero que os haya gustado y, si tenéis alguna duda, comentádmela.

Escuchando: Comando Alt Suprimir


6 interacciones en “Review del sistema Mini-PROTEAN 3 cell de Bio-Rad

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  2. avatarFelipe D.

    Estimados, conocí recién su página y me gustaría hacerles una consulta…
    Estoy montando la técnica de DGGE, mediante dentaruración por urea y temperatura, y las bandas periféricas del gel, se levantan y hacen una especie de muesca o “sonrisa”. Eso debido a qué es, cómo se puede mejorar aquello. A mi me da la impresión que puede ser que la goma puede estar haciendo algún juego con el flujo de corriente, o bien, la resistencia que tiene el sistema de carga, está un poco suelta y se genera ese problema. Me hubiese gustado subir alguna foto del gel para que fuera más dinámico y se pudiera armar una especie de foro. Desde ya muchas gracias y saludos desde Chile.

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    1. doctorGENoma Post author

      Hola Felipe. El efecto smiley es muy frecuente cuando la temperatura del gel aumenta en la electroforesis. Disminuye esa temperatura probando diferentes voltajes o intensidades (dependiendo el protocolo que sigas). Recuerda que, como referencia, el voltaje a aplicar suele ser de un ratio de 5V/cm. Aún así puede que necesites controlar la temperatura mediante frío a la hora de hacer el gel y/o en el momento de la electroforesis.
      Un saludo ;).

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      1. avatarfelipe d

        Dr genoma muchas gracias por la respuesta…. considerando aquello, ahora la sonrisa se ha invertido, es decir, es como la de una cara triste :(. Seria interesante pder adjuntar fotos para hacer mas interactivo el blog y de esta forma ayudarnos todos.
        Sabras a que es lo q se debe?.
        Otra pregunta, q pasa si al gel de poliacrilamida para dgge, se le retira toda la goma de montaje del gel, y no solo en la parte inferior?
        Muchas gracias y saludos desde Chile.

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